ВОЛЬГЕМУТА МЕТОД

ВОЛЬГЕМУТА МЕТОД (Wohlgemuth) о п-ределения амилазы, основан на том, что устанавливается предельное количество исследуемого вещества (слюны, крови, мочи, поджелудочного сока и т. д.), которое еще способно при определенных условиях опыта нацело расщепить известное количество крахмала до стадия ахроодекстринов, т. е. до исчезновения реакции с иодом. Вольге-мут предлагает две модификации—получасовую и 24-часовую. В том и другом случаях из испытуемого материала в ряде пробирок готовятся последовательно убывающие разведения таким образом, что во все пробирки помещают по 1 куб. см воды; в первую прибавляют 1 куб. см исследуемой жидкости, перемешивают, переносят 1 куб. см смеси в следующую пробирку, также перемешивают и переносят 1 куб. см в дальнейшую, и так до последней пробирки. Затем, при 24-часовой модификации, прибавляют всюду по 5 куб. см 1%-гюго раствора крахмала, немного толуола и оставляют на сутки в термостате,после чего прибавляют всюдупочтидоверху пробирки водопроводной воды и 0,1 нор-мальн. раствора иода по каплям, до ясной окраски. Отмечают пробирку, в к-рой не появляется характерной для крахмала синей или фиолетовой окраски, а имеется лишь свойственное декстринам красновато-коричневое окрашивание. Амилолитическую силу выражают числом куб. сантиметров 1%-го крахмала, которое может быть в условиях опыта расщеплено 1 куб. см испытуемого материала. Если, напр., предел (исчезновение йодной реакции, т.е. расщепление 5 куб. см раствора крахмала) достигнут в 4-й пробирке, где имелось 0,0625 куб. см исследуемого вещества, то 1 куб. см последнего в состоянии расщепить количество крахмала, соответствующее пропорции: 0,0625:5 = 1: ж, откуда х = -^^ = 80. Последняя величина и является мерилом активности фермента и обозначается через D^ji, ^гД^е верхний и нижний показатели указывают условия опыта (продолжительность и t°). При получас, постановке, вместо 5 куб.)СМ 1%-ного крахмала, берут 2 куб. см 0,1%-ного, и пробирки для более равномерного нагревания помещают не в термостат, а в водяную баню при 38°. Расчет ведется совершенно аналогично, амилолитическая сила выражается в кубическ. сантиметрах 0,1%-ного крахмала и обозначается символом d₃₀, . В. м., получивший широкое распространение, следует признать пригодным лишь для весьма грубых, приблизительных определений, т. к. он позволяет учитывать только очень резкие колебания количества или активности фермента (порядка 50— 100%). Более точные результаты дают лишь методы, учитывающие действие амилазы по количеству образующегося сахара. Лит.: Wohlgemuth J., Uber eine neue Methode zur rruantitativen Bestimmung des diasta-tischen Ferments, Biochemische Zeitschrift, Band IX, 1908; его те, Fermentmethoden, p. 39, Berlin, 1913.                                                           В. Эигельгардт.